技術文章
一旦重組病毒已被純化和鑒定,即可在293 細胞中進行大量擴增。本手冊提供了遞增培養規模和腺病毒感染周期的基本方法,按這一方法zui終得到的病毒量約為3×1011~3×1012。由于一個細胞中所含的病毒顆粒為1000~10000,因此1L 培養細胞可得到約5×1012 病毒顆粒。如果要把病毒用氯化銫梯度離心純化,則必須至少3×108 的細胞,這樣才能正確分辨出病毒帶。對于蛋白表達,則根據需要可在任何一步擴增步驟中停止,離心沉淀細胞后按照適當的操作方法進行蛋白抽提(根據蛋白類型的不同抽提上清或細胞沉淀)。為優化時間進程,每個感染周期必須與下一次細胞擴增培養同步。如果由于各種原因不能同步,則必須將病毒凍存,直至下一次細胞培養開始后再融化病毒。注意每次擴增都將會剩下一些病毒,這些病毒先不必丟棄,以便下一步擴增失敗時備用。每次擴增都用zui低代的病毒顆粒,這樣產生突變型病毒的可能性會大大降低。
*代 | 第二代 | 第三代 | 第四代 | |
每瓶細胞數 | 1×105 | 5×106 | 1×107 | 1×107 |
培養瓶大?。╟m2) | | 75 | 175 | 175 |
培養瓶數 | 24 孔板1 孔 | 1 | 3 | 30 |
| | 擴增后的病 | | |
感染來源 | 稀釋的空斑 | | 第二代病毒 | 第三代病毒 |
| | 毒保存液 | | |
| | 0.5 mL 或 | | |
每瓶接種量 | 0.1 mL | | 1 mL | 1.5 mL |
| | 2.5×107 | | |
總培養體積 | 1 mL | 10 mL | 90 mL | 900 mL |
MOI | 0.01 | 5 | 25 | 25 |
滴度(VP/mL) | 1×108~9 | 5×108~9 | 3.3×108~9 | 3.3×108~9 |
總病毒量 | 1×108~9 | 5×109~10 | 3×1010~11 | 3×1011~12 |
來源:低速離心機